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如何選擇二抗

更新時(shí)間:2024-06-19      點(diǎn)擊次數(shù):490

如何選擇二抗



二抗:二抗是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體,上面通常連有酶或熒光素等標(biāo)簽。由于二抗所具備的優(yōu)點(diǎn)使得其在

免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中得以應(yīng)用廣泛,如western blot(通過與特異性抗體結(jié)合來鑒定蛋白質(zhì)),ELISA(以耦聯(lián)有酶的抗體或抗原為標(biāo)記來檢測(cè)特異

性的蛋白質(zhì),尤其是相應(yīng)的抗原或抗體),免疫組織化學(xué)(檢測(cè)組織中的特異性抗原),免疫細(xì)胞化學(xué)(通過免疫學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞的抗原

組成),流式細(xì)胞術(shù)(通過檢測(cè)激光所激發(fā)熒光來鑒定分離不同類型的細(xì)胞)及免疫沉淀(通過抗原與抗體的特異性結(jié)合作用來分離相應(yīng)

抗原)。


1.二抗針對(duì)某一特定物種(如小鼠)的所有抗體均具有特異性,因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記,大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用

;此外,一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)二抗分子,從而使信號(hào)大大增強(qiáng),提高了實(shí)驗(yàn)靈敏度。二抗可以耦聯(lián)有幾種不同的標(biāo)記,可以是酶

,熒光素,或生物素。

 二抗的種屬來源


一般來說,不同的種屬來源與二抗的質(zhì)量沒有必然的聯(lián)系,來源于山羊的二抗與來源于驢的二抗在一般的實(shí)驗(yàn)里沒有太多的差別。

然而在一些特殊的實(shí)驗(yàn)里,如雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)里,如果其中一個(gè)一抗是山羊來源的,一個(gè)是小鼠來源的,則相應(yīng)的二抗分別要抗山羊和抗小鼠的

二抗,這時(shí)候,二抗就不能選擇山羊或者小鼠來源的。選擇相應(yīng)的驢來源的二抗,就非常適合做類似雙標(biāo)的免疫實(shí)驗(yàn)。雙標(biāo)得2個(gè)都抗才行,

故選擇第3個(gè)種源的抗體。



支原體檢測(cè).png


2.選擇哪種形式的二抗,是整個(gè)IgG分子,F(xiàn)(ab')2片段,還是Fab片段?


整個(gè)IgG分子:此種抗體適用于多數(shù)情況。


F(ab')2片段:該種抗體是由兩個(gè)靠二硫鍵連接的用于結(jié)合抗原的Fab片段組成,這些抗體用在特定的情況中,如需要避免抗體與具有Fc受體

的細(xì)胞結(jié)合的情況。


Fab片段:它們只有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn),一般用來封閉內(nèi)源性免疫球蛋白。




3.二抗的耦聯(lián)標(biāo)記


一般來講,耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,PAP),熒光基團(tuán)(FITC, RRX, TR, PE)

和生物素。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實(shí)驗(yàn)。對(duì)于western blot和ELISA,常用的二抗是酶標(biāo)二抗,而細(xì)胞或組織標(biāo)記實(shí)驗(yàn)(

細(xì)胞免疫化學(xué),組織免疫化學(xué),流式細(xì)胞術(shù))中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗,免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的

二抗。如果想要更大程度的放大檢測(cè)信號(hào),可以使用biotin/avidin檢測(cè)系統(tǒng)。在一些熒光檢測(cè)方案中,則需要選擇不同的熒光標(biāo)記;

而金顆粒標(biāo)記的二抗則更多的應(yīng)用于免疫電鏡中。


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