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細胞復蘇過程

更新時間:2024-07-01      點擊次數(shù):594

真核細胞通常懸浮在帶有血清和冷凍劑的培養(yǎng)基內(nèi),保存在-196°C 的液氮中。如果是商業(yè)訂購的,通常儲存在用干冰包裹

的凍存管中。所以凍存后的細胞必須快速解凍后立即培養(yǎng),以獲得最大的生存能力,為了除去凍存時的添加劑, 

24 小時后要更換培養(yǎng)基。


一、材料


培養(yǎng)基, 37’C 預熱

培養(yǎng)瓶

裝有70 %乙醇的燒杯

1ml 、10ml 的移液管、移液器及移液頭

二、步驟


把凍存細胞的管子在37’C 的水浴融化,快速搖動, 1分鐘內(nèi)使管內(nèi)的細胞融化。

把融化的管子浸入裝有70 %乙醇的燒杯內(nèi),整個實驗在超凈臺內(nèi)進行。

小心打開凍存管,不要讓乙醇浸入管內(nèi)。

將凍存管內(nèi)的細胞轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶中,并立即加入預熱的培養(yǎng)基。

蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子,培養(yǎng)24 小時。

用新培養(yǎng)基替換老培養(yǎng)基。

繼續(xù)培養(yǎng)2~3 天或按說明書上的建議進行操作。

三、溫馨提示


1.融解的細胞必須馬上培養(yǎng),如果來不及培養(yǎng),就保存在液氮中。


2.細胞通常凍存為1 ml 的體積,加入新的培養(yǎng)基至10ml 。


3.可以在融化了凍存細胞后,把細胞離心下來,并用新鮮的培養(yǎng)基重新懸浮細胞,這種做法只適用于那些對凍存劑敏感的細胞,或者笫二天因為有事不能更換新培養(yǎng)基的情況。


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