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單克隆抗體的制備原理

更新時間:2024-07-19      點擊次數(shù):460

原理1:單克隆抗體(MAb)與抗血清(又稱多克隆抗體,PAb)最主要的區(qū)別是MAb為單一種B細胞克隆所產(chǎn)生的一種均一的免疫球蛋

白分子。所以MAb是B細胞克隆的標志,是一種的抗體,它的特異性是針對一個抗原決定簇的。制備單克隆抗體不能用化學分離的方法

從多克隆抗體中去分離純化得到它,而是用分離產(chǎn)生抗體的B細胞克隆的方法得到它。為了使B細胞克隆能在體外人工培養(yǎng)下長期存活并產(chǎn)生

均一的MAb,G.K?hler合Milstein于1975年創(chuàng)立了雜交瘤方法。所以制備單克隆抗體的技術又稱雜交瘤技術

(hybredoma technique)。


  雜交瘤技術的基本原理是用分泌抗體但不能長期培養(yǎng)的B細胞與能在體外長期培養(yǎng)并可低溫保存的腫瘤細胞進行雜交。篩選得到的雜交瘤

細胞應該是既能分泌抗體又有瘤細胞的特性,可長期傳代培養(yǎng),又可在液氮中保存的細胞。把這些細胞單克隆化,用單克隆化的雜交瘤細胞

進行單克隆抗體的生產(chǎn)。


  原理:常用的單克隆抗體是小鼠的單抗,此外也有大鼠的和人源的單抗。人源單抗制備比較復雜。小鼠單抗的制備通常是使用Balb/c

小鼠的B細胞和它的骨髓瘤細胞。大鼠的單抗制備通常用Lou/c大鼠及其骨髓瘤和Y3/AO大鼠及其骨髓瘤細胞。B細胞是從免疫動物的脾臟中

分離出來的。動物免疫方法與抗血清制備相同,只是在制備脾臟前3d必須進行一次靜脈加強注射以保證得到的B細胞有旺盛的分泌抗體的活性

。骨髓瘤細胞有許多細胞株是經(jīng)過誘變和篩選得到的缺陷型。篩選的標準是①瘤細胞本身不產(chǎn)生抗體或者產(chǎn)生抗體的某種鏈,但不能分泌;

②是次黃嘌呤鳥嘌呤核苷酸轉移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶激酶(TK)的缺陷型。因為這種缺陷型的瘤細胞正常的核酸合成途徑被氨基喋吟

(aminopterin)阻斷后,由于缺失這些酶,即使補充它的底物次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T),核酸合成的旁路也不能起到救援的作用

,結果導致瘤細胞死亡(圖7—2)。而雜交瘤細胞因帶有B細胞的全套基因,在HAT存在的條件下借助于HGPRT和TK的作用通過替代的核酸

合成途徑能正常合成DNA和RNA。所以雜交瘤能正常地生長繁殖而被選擇出來。未被融合的游離的B細胞只能存活3d而后自行死亡。

這就是用HAT培養(yǎng)基進行選擇的原理


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