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PCR反應(yīng)的三個主要步驟

更新時間:2024-07-24      點擊次數(shù):646

PCR模板反應(yīng)的三個主要步驟


1、模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;


2、模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合;


3、延伸:DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及

需要合成的DNA片段長度。


傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp大概需要1分鐘、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需

約10-15秒。有修正功能的則會比較慢。

PCR反應(yīng)的三個主要步驟



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