尿液中含有游離血紅蛋白稱為血紅蛋白尿，為透明的鮮紅色(含氧血紅蛋白)或暗紅色(含高鐵血紅蛋白)，嚴重者呈濃茶色或

醬油色，離心后顏色也不改變，沉渣中無紅細胞，隱血試驗呈陽性，正常人尿液中無游離血紅蛋白，當體內(nèi)大量溶血，

尤其是血管內(nèi)溶血，血液中游離血紅蛋白可大量增加，當超過1.00~1.35g/L時，即可出現(xiàn)血紅蛋白尿，此種情況常見于

血型不合輸血、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、寒冷性血紅蛋白尿、急性溶血性疾病等，還可見于各種病毒感染、鏈球菌敗

血癥、瘧疾、大面積燒傷、體外循環(huán)、腎透析、手術(shù)后所致的紅細胞大量破壞等情況，因此尿血紅蛋白定性檢測試驗臨

床價值。

尿血紅蛋白定性檢測試劑盒(化學法)又稱尿隱血試驗，其檢測原理是血紅蛋白中的亞鐵血紅素催化H2O2作為電子

受體使色原底物(鄰聯(lián)甲苯胺)氧化成鄰甲偶氮苯而顯綠色或藍色，其顏色深淺與血紅蛋白含量成正比，根據(jù)顯色的快慢可以

半定量血紅蛋白即隱血含量，多用于人或動物尿液的尿血紅蛋白檢查。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其

他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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