TdT末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase)試劑是一種不依賴于模板的DNA聚合酶，催化脫氧核苷酸結(jié)合到DNA分子的3’羥基端。帶有突出、

凹陷或平滑末端的單雙鏈DNA分子 均可作為TdT的底物，加尾長度可達(dá)5~300nt。本酶經(jīng)電子重構(gòu)架技術(shù)篩選，

使其可以在45°C高溫下反應(yīng)，從而避免因DNA二級結(jié)構(gòu)造成的加尾效 率下降。優(yōu)化的活性中心結(jié)構(gòu)，使其對模板底物結(jié)合能力

更強(qiáng)，底物加尾比例更高。該末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）廣泛用于DNA的3’末端添加同聚物、利用修飾堿基（如 ddNTP，DIGdUTP）

標(biāo)記DNA 3’末端、TdT介導(dǎo)的dUTP 缺口末端標(biāo)記技術(shù)（細(xì)胞凋亡的原位檢測）等試驗(yàn)。

組分

組分名稱數(shù)量

Terminal Transferase (20 U/μl)50 μl

10×TdT Buffer1 ml

應(yīng)用

寡核苷酸或DNA?3’羥基末端標(biāo)記

DNA末端加尾(DNA?tailing)

5’-RACE

合成同一種脫氧核苷酸的寡聚鏈

活性定義

37℃  60分鐘內(nèi)，催化1nmol?dNTP加入到多聚核苷酸3’羥基末端中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位

儲存

-20℃可保存3年。

熱失活

75°C 20min。

注意事項(xiàng)

1、適量EDTA可使Terminal Transferase的活性喪失。

2、金屬離子螯合劑，較高濃度的銨根離子、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對Terminal Transferase活性具有抑制作用。

TdT末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase)試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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